La raccolta della Sala Spagnola costituisce il maggior complesso di arte spagnola conservato in Italia e conserva importanti opere su tavola del XV e XVI secolo nonché il più significativo nucleo della collezione Escosura. I dipinti, espressione dei vivaci scambi culturali che caratterizzarono la Spagna del tempo in rapporto con la cultura tedesca e fiamminga nonché con la diffusione del gotico internazionale e la pittura prospettica italiana rappresentavano, secondo il gusto di Parmeggiani un’ideale Galleria di grandi della pittura iberica.
Degni di nota sono il San Michele Arcangelo del XV secolo, il Retablo d’altare, anch’esso del XV secolo e il dipinto intitolato Il matematico realizzato nel 1644 da Jusepe de Ribera detto lo Spagnoletto. Completano la sala alcuni interessanti mobili intarsiati in legno.